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从餐巾纸上出现的巾纸技术质粒克隆技术：通过DNA连接酶共价连接，筛选具有抗生素耐药表型的上出细菌菌落。
1972年11月，现的学习在夏威夷檀香山威基基海滩的质粒值一家饭馆中，来自匹兹堡大学、克隆科研华盛顿大学和德克萨斯大学的每位一群科学家（包括Stanley Falkow，Stanley Cohen，好好Herbert Boyer和Charles Brinton）在饭馆的从餐一张餐巾纸上写下了利用新发现的EcoRI来进行质粒克隆试验的疯狂想法（图1）。1973年初，巾纸技术这群科学家们就开始试验验证，上出真正的现的学习试验比想象中还要顺利。科学家们成功将EcoRI内切酶切割产生的质粒值R6-5质粒DNA片段在体外随机结合，然后通过DNA连接酶共价连接，克隆科研将所得混合物中的每位DNA转入氯化钙处理的大肠杆菌中，并在含有抗生素的培养基上筛选具有抗生素耐药表型的细菌菌落。
图1 餐桌上提出新想法（图片来源：PNAS）
正如后来Paul Berg的评论所说：“不需要天才就能发现，如果你能创造出互补的人工末端，两个DNA分子就会结合在一起”。1973年11月，一篇名为“Construction of Biologically Functional Bacterial Plasmids In Vitro”的文章登上PNAS，正式宣布将要影响生物学历史的分子克隆技术的诞生（图2）。
图2 研究成果（图片来源：PNAS）
现代分子克隆技术一般包括5个基本的步骤：载体和插入片段的制备、连接、转化、筛选以及验证。实验过程中的每一步都是分子克隆成功的关键。例如在载体和插入片段的制备阶段，经常会遇到酶切不完全、酶切带型异常等情况，这些看似简单的问题，却也困扰着一代又一代的科研人员。
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题图来源：Science，仅用于学术交流。
排版|乔维钧